1.同型對照：同型對照須盡可能與一抗同種屬、同亞型（IgG1/IgG2a/IgG2b/IgM）、同濃度、同標記方式，且確認不與靶標結合。濃度不匹配，對照就失去意義。

2.陽性對照：陽性對照要與實驗樣本同物種、同固定條件、同處理流程；批次穩定、可追溯、可重復；表達譜要經過文獻或表達數據庫確認。弱陽性樣本是靈敏度的標尺——它能染出來，說明你的體系確實夠靈敏；強陽性樣本用于驗證整套染色體系完整可用，排查實驗流程失效的情況。注意：強陽性易發生信號飽和，無法評估體系對低豐度靶點的檢出能力。免疫相關指標常用扁桃體、淋巴結、脾臟等免疫細胞富集組織作為陽性對照。

3.陰性對照：生物學陰性樣本對照：選用經文獻、蛋白表達數據庫證實生理條件下不表達靶蛋白的組織/ 細胞，或采用CRISPR?KO 敲除靶基因的樣本。經蛋白表達水平驗證的體外培養細胞系KD樣本，也可以作為WB實驗的陰性樣本；省略一抗只是“空白對照"，只能排除二抗和檢測系統的背景；抗體Fc段非特異性結合要靠同型對照來排除；內源性酶、自發熒光要靠背景對照排除。

4.陽性、陰性對照應與待測樣本采用同一批試劑、一致的處理流程；盡量同批次染色，保證實驗條件對等。

★核心口訣：陽性對照看體系，陰性對照看特異性，同型對照看背景，空白對照看檢測系統，自發熒光看本底，單色對照看光譜。